Dezvoltarea unor metode fiabile și standardizate pentru testarea susceptibilității roiurilor de țânțari la insecticide este crucială pentru înțelegerea eficacității noilor ingrediente sau formulări active. Metodele de testare a susceptibilității roiurilor de țânțari la insecticidele sau produsele de contact (cum ar fi cele promovate în programele de sănătate publică) sunt bine stabilite și standardizate. Cu toate acestea, metodele de testare pentru insecticidele volatile sau aerosoli utilizate în produsele de uz casnic sunt dificil de implementat eficient. Pe baza recomandărilor Organizației Mondiale a Sănătății pentru insecticidele de uz casnic, am dezvoltat o metodă standardizată și de mare randament pentru testarea produselor aerosoli folosind țânțari în cuști și o metodă eficientă de dezinfecție efectuată într-o cameră de testare Peet-Grady (camera de testare PG). Am validat eficacitatea acestei noi metode folosind populații de țânțari Aedes și Anopheles rezistenți și sensibili la insecticide. O caracteristică nouă a acestei metode este includerea unei camere îndreptate către cuștile de țânțari, permițând evaluarea cantitativă în timp real a ratelor de ucidere a țânțarilor după expunerea la insecticid. Dezinfecția cu tampon îndepărtează eficient uleiul aerosol rezidual care conține piretroizi de pe suprafața camerei de testare, cu rate de mortalitate mai mici de 2% pentru țânțarii sensibili testați direct pe suprafața camerei. Nu s-a observat nicio eterogenitate spațială în ceea ce privește ratele de ucidere sau mortalitate în rândul țânțarilor în cuști în camera PG. Metoda noastră cu cușcă dublă oferă un randament de opt ori mai mare decât metoda de zbor liber, permițând testarea simultană a diferitelor tulpini de țânțari și discriminarea eficientă între populațiile de țânțari sensibili și rezistenți testate în paralel.
Până în prezent, insecticidele aerosoli au fost utilizate în principal în locuințe pentru protecție personală, cu o utilizare limitată în programele de sănătate publică. Cu toate acestea, studii recente au arătat utilizarea pe scară largă a insecticidelor casnice în zonele în care bolile transmise prin vectori sunt predominante. Indiferent dacă motivația este repelentul împotriva țânțarilor sau prevenirea bolilor, există o nevoie stringentă de metode standardizate și ușor de utilizat pentru screening-ul populațiilor endemice de țânțari pentru a determina sensibilitatea la insecticidele casnice. Acest lucru este crucial pentru prezicerea eficacității insecticidelor împotriva vectorilor locali și pentru înțelegerea modului în care utilizarea insecticidelor casnice influențează selecția evolutivă pentru rezistența la insecticide.
Metoda suplimentară 1 oferă instrucțiuni detaliate pas cu pas pentru desfășurarea programului nostru de testare a insecticidelor cu aerosoli.
Deși ghidurile OMS recomandă utilizarea nebulizatoarelor automate, acestea nu oferă specificații tehnice specifice. Utilizarea nebulizatoarelor automate este crucială, deoarece nebulizarea manuală într-o cameră cu propilen glicol nu necesită doar multă muncă, ci poate cauza și inconsistențe spațiale și variații ale duratei de nebulizare.
Camera de reacție trebuie sterilizată după fiecare test, însă metoda de curățare internă recomandată în Ghidul OMS implică aplicarea apei dintr-un furtun. În munca noastră zilnică, această metodă este etapa care necesită cea mai mare muncă în operarea echipamentelor bioanalitice, așa că am dezvoltat și testat o procedură de sterilizare bazată pe tampon.
Părțile detașabile ale ventilatorului se tratează conform descrierii de mai sus, iar palele și cadrul ventilatorului se curăță cu un burete înmuiat într-o soluție de 5% Decon 90.
Pe baza relației dintre durata pulverizării și debitul de livrare a produsului, dozatorul nostru de aerosoli a demonstrat, de asemenea, o bună precizie în controlul raportului de dozare a aerosolului, cel puțin pe intervalul testat de 1 până la 4 ori. După cum se arată în Fig. 3b, această caracteristică este deosebit de importantă pentru caracterizarea relației doză-răspuns a noilor formulări de aerosoli sau pentru determinarea dozei de identificare pentru detectarea rezistenței la insecticide.
Demonstrăm că protocolul nostru revizuit pentru evaluarea insecticidelor aerosoli de uz casnic, utilizând dezinfecția cu tampon, cuști duble, pulverizatoare controlate de la distanță și înregistrarea biometrică de la camerele de acțiune, este o alternativă mai eficientă și fezabilă la protocolul actual.OMSrecomandări. Metoda de dezinfecție cu tampon, care necesită doar 20 de minute, economisește semnificativ timp în comparație cu protocolul existent (care necesită de obicei o oră per cameră de testare). De asemenea, reduce timpul petrecut de operatori purtând echipamentul individual de protecție complet (de exemplu, căști respiratorii și îmbrăcăminte de lucru antistatică). În plus, această metodă generează mai puțin lichid și îmbrăcăminte contaminate pentru tratament decât o curățare completă a camerei de testare, reducând astfel la minimum potențialul de contaminare a camerei care adăpostește camera de testare. Metoda de dezinfecție cu tampon este, de asemenea, potrivită pentru dezinfecția camerelor de testare semipermanente care necesităminimAmplasarea mobilierului într-o varietate de amenajări de camere.
O problemă cheie explorată în acest studiu și în altele este standardizarea dozelor de expunere la insecticidele aplicate în mediu în diferite protocoale de testare. După cum se arată în Figura 2b, în ciuda unei durate fixe de pulverizare, volumul de pulverizare a variat în funcție de tipurile de aerosoli, reflectând potențial diferențe în procesele de fabricație (de exemplu, presiunea internă, utilizarea propulsorului, structura duzei etc.). În plus, lipsa actuală a dispozitivelor de pulverizare de la distanță disponibile comercial cu flexibilitatea necesară în durata pulverizării limitează utilizarea lor în evaluarea relației doză-răspuns pentru controlul țânțarilor. Pulverizarea manuală prin trape de testare sau trape de acces (dacă sunt disponibile) poate duce la variații ale dozelor de expunere. De fapt, rezultatele noastre evidențiază necesitatea și importanța reducerii acestor surse de variație. Pentru populațiile rezistente de Aedes aegypti, am observat o corelație între doza de aerosol și determinarea finală a susceptibilității sau rezistenței (Figura 3b). În mod ideal, dozele de aerosoli ar trebui standardizate în grame de substanță aerosolizată, mai degrabă decât în durata aerosolizării, pentru a facilita comparațiile între diferite studii.
RCAD oferă o abordare alternativă pentru cercetările viitoare care minimizează impactul variațiilor procesului. Deși am constatat că standardizarea spray-urilor de aerosoli nu este fezabilă, am demonstrat că masa de aerosol administrată prin diferite recipiente de aerosoli poate fi estimată reproductibil prin calibrarea lungimii de pulverizare (Figurile 2b, 3a). O astfel de standardizare a concentrației de aerosoli în orice cameră de testare este crucială pentru îmbunătățirea reproductibilității rezultatelor.
Pe baza experienței noastre și a altor grupuri de cercetare, recomandările conținute în Ghidul actual privind utilizarea metodelor de detectare a aerosolilor pentru testarea țânțarilor zburători liberi prezintă provocări logistice semnificative pentru studiile de laborator și semi-teren. De exemplu, metodele de detectare a țânțarilor zburători liberi au un randament foarte scăzut (inclusiv recapturarea țânțarilor zburători liberi supraviețuitori, care necesită multă muncă) și suferă de o serie de limitări tehnice, cum ar fi dificultățile în determinarea ratelor de ucidere în timp real.
Deși experimentul nostru validat cu cușcă dublă abordează problema limitărilor de flux și este o metodă fezabilă pentru screening-ul susceptibilității țânțarilor la insecticidele aerosoli, trebuie menționat că ratele de mortalitate ale țânțarilor din Insulele Cayman au fost semnificativ mai mici în experimentul cu cușcă decât în experimentul cu zbor liber (Fig. 5c, Tabelul 1). Această diferență poate reflecta o reducere a dozei de insecticid din interiorul cuștii, deoarece mai puține picături de aerosol pătrund în plasă și intră în cușcă. Studiile viitoare ar putea utiliza țesături cu plasă mai mare și modele de cuști cu debite de aer mai mari ale ventilatorului (de exemplu, modele cilindrice) pentru a valida în continuare rezultatele obținute cu diferitele metode experimentale.
Data publicării: 02 februarie 2026